談?wù)劙准?xì)胞介素1α（IL-1α）ELISA試劑盒的操作步驟

　　白細(xì)胞介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒的操作步驟如下：
 

　　1、加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
 

　　2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜,37℃反應(yīng)60分鐘。
 

　　3、溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
 

　　4、每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液)100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
 

　　5、溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
 

　　6、依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。
 

　　7、依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
 

　　8、用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測。